免疫蛍光実験は、次の主要な手順に基づいています。
1. 目的のタンパク質に特異的な抗体が結合します。
2. 顕微鏡を使用して目的のタンパク質を可視化するために、蛍光色素をこれらの免疫複合体に結合させます。
直接免疫蛍光法と間接免疫蛍光法に区別されます。直接免疫蛍光法では、一次抗体が蛍光体 (蛍光色素とも呼ばれる) に直接結合されるため、取り扱いが簡単で、迅速に視覚化できます。間接免疫蛍光法では、一次抗体に特異的に結合する二次蛍光体結合抗体を使用して、目的の構造を可視化します。
2 番目のアプローチは、直接免疫蛍光法よりも時間がかかりますが、二次抗体をさまざまな一次抗体に使用できるため、一般的に安価であるなど、いくつかの大きな利点があります。さらに、複数の一次抗体を特定の二次抗体と組み合わせることにより、複数のタンパク質を 1 つのサンプルで並行して特異的に可視化できます (多色免疫蛍光法) 。 それぞれが異なる蛍光体で標識されています。
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